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實(shí)驗(yàn)選擇合適的抗體要點(diǎn)指南
點(diǎn)擊次數(shù):950 更新時(shí)間:2023-03-06

實(shí)驗(yàn)室科研工作離不開(kāi)抗體,WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體,那科研實(shí)驗(yàn)室如何選擇合適的抗體呢?

一. 一抗選擇要點(diǎn):

1).確定抗體的名字。注意中英文名字、它名、亞型等信息。

2)確定你的實(shí)驗(yàn)類(lèi)型。Elisa,WB,IHC,ICC,還是FACS。一般抗體的說(shuō)明書(shū)都會(huì)列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過(guò)適用于何種實(shí)驗(yàn)的類(lèi)型,如果抗體說(shuō)明書(shū)沒(méi)有提及的應(yīng)用類(lèi)型,并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類(lèi)型,而僅是說(shuō)明尚未經(jīng)過(guò)此種實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書(shū)列出的已驗(yàn)證的類(lèi)型來(lái)選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。

3).確定實(shí)驗(yàn)樣本的種屬。Human,Mouse,還是Rat。一般抗體說(shuō)明書(shū)都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種物種實(shí)驗(yàn),請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書(shū)列出已驗(yàn)證的種屬來(lái)選擇適合你實(shí)驗(yàn)的抗體。

4).樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇最合適的抗體,待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過(guò)程中是否會(huì)變性,蛋白空間構(gòu)象的改變,會(huì)影響抗體的免疫親和反應(yīng)。

5).單多克隆抗體的選擇。市面上的抗體還是以多克隆抗體為主,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易出現(xiàn)非特異性染色(可以通過(guò)封閉等避免)。

二. 二抗選擇要點(diǎn):

1).種屬來(lái)源。主要根據(jù)一抗種屬來(lái)源來(lái)決定購(gòu)買(mǎi)二抗來(lái)源,如一抗是小鼠來(lái)源,那二抗就買(mǎi)抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。

2).標(biāo)記物的選擇。有HRP、Biotin、熒光素等標(biāo)記物。一般SP三步法二抗選擇Biotin標(biāo)記的二抗,以與后面的SP結(jié)合反應(yīng),而免疫熒光染色就需要購(gòu)買(mǎi)不同熒光素標(biāo)記的二抗,如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。


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